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    奶牛(niú)性別鑒定與(yǔ)性(xìng)別控製

     

    奶牛(niú)生產的主要目的是產出更多的牛(niú)奶供人們生活所(suǒ)需(xū)。而(ér)奶牛繁殖是以產出更多母犢為主要目的(de)。故(gù)奶牛生產中的性別鑒定(dìng)和性(xìng)別控製顯得尤(yóu)為重要。
    一、性別控製技(jì)術對奶(nǎi)牛生產的意義
    性別控製
    是指通過人(rén)為(wéi)幹涉動物(wù)正(zhèng)常的生殖過(guò)程,使雌性動物按人的意願(yuàn)生出所需性別(bié)後代的一種繁殖技術。其對奶牛生產有重要意義:
    1)充分發(fā)揮動物的生產潛能,產出更多母犢。
    2)克(kè)服異性孿生不育。
    3)去除不(bú)利的陰性基因,防止性連鎖疾病。
    二、精子的性別分離
    哺乳動物精子類型包括x精(jīng)子和Y精子。兩(liǎng)類精子在比重、體(tǐ)積、表麵電荷、表麵抗原(yuán)等方麵略有差異。據此可通過沉降法、離(lí)心法、過濾法、電泳法(fǎ)、H—Y抗原法等方法分離這兩(liǎng)類精子,以期(qī)達到控製(zhì)後代性(xìng)別的目的。理論上講這是控製性別最經濟、最有效的方法。然而迄今為止,這些方法在一些實驗中雖曾得到較滿意的結果,使某(mǒu)一性別的後代明(míng)顯地多於(yú)另一性別,但這隻在一定程度上改變了後代(dài)出生的性別(bié)比例,並沒(méi)有超出自然出現的性別比例(lì)範圍。
    近年,細胞流式分類器(qì)在分離兩類精子上顯示出較(jiào)大的(de)優勢。用無毒性的活體染料將精子染色,染色(sè)的活精子逐(zhú)個通過(guò)細胞分類器(qì)的微柱。此時,用一束(shù)激光激發熒光染料,使通過微柱的精子發光(guāng)。因X精子DNA含量略高於Y精子(A:2.5%-4.5%),故x精子發光量略高於Y精子。這種發光(guāng)亮(liàng)的微小差(chà)別(bié)由光學測(cè)定(dìng)儀記錄並把信號送給電腦。精液通過激(jī)光束後,便被分成微滴(dī)。電腦把電(diàn)子信息反饋到產生微滴的部位,使每個微滴帶電。x精子帶正電,Y精子帶負電(diàn)。當帶電精子進入電場後,兩類精子便分別向不同的方向移動,進入不同的容(róng)器。分離後的部分(fèn)精子未(wèi)受損傷(shāng),可用於受(shòu)精。
    細胞流式分類器目前還不可能進入實用階段(duàn),一方麵是由於分離精子的速度很慢,每(měi)小時隻能分離(lí)35萬個精子。另一方麵,這種儀器價格昂貴,一般的生產單位無力支付(fù)如此高的費用。
    三、早期胚胎性別鑒定
    (
    ) 細胞遺傳學法
    通過核型分析來完成胚胎性別鑒定,最早用於兔、羊、牛。先取少量的胚胎(tāi)細胞,在含有秋水仙素的培養液中培養,由於秋水仙素的阻抑作用使細胞的有絲分裂停留在中期,在滲透壓的作用下使細胞膨脹,細胞壁破裂,染色(sè)體被釋放,然後經固定和姬姆薩染色後在顯微鏡下觀察。由於有絲(sī)分裂被阻滯在中期,故染(rǎn)色體(tǐ)縮短,形狀規則,並有特異的帶型,通過核型分析,確定其性染色體類型屬XX還是XY型,這種方法鑒定胚胎性別的準確率幾乎是100%,但操作過程比較煩瑣。
    (
    ) X染色體連接酶活力測(cè)定法
    哺乳動物性染色體的類型,雌性為XX而雄性(xìng)為XY型,為了維持性別之間的基因平衡,在(zài)胚胎發育的早(zǎo)期,雌性(xìng)個(gè)體每個細胞中的一條x染色體是失活的(de),盡管這條x染色體失活的確切時間尚不知道,但可以肯定的(de)是在這條染色體失活前有一段(duàn)時間,兩條X染色體均有活性,並進行轉錄,這表現在胚胎發育的早期,雌性胚胎x染色體連(lián)鎖酶(méi)的活性是(shì)雄性胚胎的(de)兩倍。依(yī)據這一事實,WilliamsMonk等(děng)檢測了小鼠桑椹胚至囊胚(pēi)期這段時(shí)間X染色體連鎖酶的(de)活性,即葡萄糖-6—磷(lín)酸脫氫酶的活性,以預測(cè)胚胎的性別,移植後(hòu)分娩結果表明雌性、雄(xióng)性胚胎的準確率分別為72%、57%。這種方法鑒定胚胎的準確率較低,主要原因是(shì)不知道X染色體失活(huó)的確切時間
    (
    ) H—Y抗原法
    目前利用H-y抗原進行(háng)胚胎性別鑒定的方法有兩種(zhǒng),即細胞毒性分析法和間接免疫熒光法。
    1.
    細胞毒(dú)性分析法
    將胚胎培(péi)養在含有H-Y抗血清與補體(豚鼠血清)的培養液中進行培養,有H-Y抗原的胚胎表現出一定的細胞溶解,此類胚胎(tāi)被判為雄性胚胎。能夠繼續發育即H-Y陰性的胚(pēi)胎移植(zhí)後所生仔鼠有86%為雌性。該方法以破壞雄性胚胎為代價,故(gù)現(xiàn)已很少采用。
    2
    .間接免疫(yì)熒光(guāng)法
    先將8細胞至囊胚期胚胎與H-y抗體反應30min,再(zài)與(yǔ)用異硫氰酸鹽熒光素(FITC)標記的(de)免疫球蛋白M(IgM)抗體反應。然後在熒光顯微(wēi)鏡(jìng)下檢查胚胎是否(fǒu)帶有熒光素,若有熒(yíng)光素(sù)則被判定為雄性。此法主(zhǔ)要優點(diǎn)是不損害胚胎,準確率比較高,豬、綿羊、牛雌性鑒定準確率分別可達81%、85%和89%。但該方法需要熒光顯微鏡和豐富的經驗。
    (
    ) Y染色體特異性DNA探針法
    應用這一方法必須經(jīng)過複雜(zá)的技術過程製備特異性的、經同位素標記的Y染色體特(tè)異序列的探針,用這(zhè)一探(tàn)針與從胚胎細胞(bāo)中提取出的少量DNA雜交,雜交結果呈陽性的說明有Y染(rǎn)色體,可判(pàn)為雄性。該方法(fǎ)準(zhǔn)確率達90%。
    九十(shí)年代初,英國學者發現了存在於Y染色(sè)體短臂上的、決定雄性的DNA片段(duàn),定名為SRY,即性別決定區(基因)。這一發現被認為是九十(shí)年代以來生物科學的重(chóng)大(dà)成就之一,為進(jìn)一步開展性別控製研究奠定了基礎。將其與(yǔ)聚合酶(méi)鏈反應(PCR)擴增技術相結(jié)合,應用於胚胎性別鑒定,準確率可達100%;國(guó)內研究者已成功地用PCR技術直(zhí)接(jiē)擴增(zēng)牛胚胎(tāi)的(de)SRY特異DNA序列,能夠準確地鑒定牛胚胎的性別。
    四、出生(shēng)前胎兒的性別確定
    (一) 羊水成分分析法
    在出生前確定胚胎性別是通過測定羊水中的激素(sù)含量,或分(fèn)析性染色體,或用Y染色體特異性DNA操針檢測從羊水中分離獲得的細胞,以確定性別的方法。如果胎兒性別不是所需要的,則可實施流產。據報道從懷孕3040天的牛早(zǎo)期胚胎活組織采樣,經染色體分析可以確定胎兒的性別,但這種方法同(tóng)樣要對不需要的胎兒實施流產。
    (二) B超鑒定法
    根據胎兒性別的形態學差異(yì),可利用B超確定胎兒性別。具體說,可根據胎兒的生殖結節或陰囊與乳房進(jìn)行性別判定。在胎兒分化(huà)過程中,生殖結(jié)節在雄性中由後腿間(jiān)起始部位移(yí)向臍帶(dài),在雌性則移向尾部(bù)。鑒別時應仔細探查臍、後腿及尾區,確認頭、搏動的心髒、臍帶等標記部位。最佳(jiā)鑒別時(shí)間為妊娠後50 - 60d。鑒別可在生(shēng)產條件下進行,然而需要相當豐富的經驗。
    總之,影響性比的因素很複雜。通過進(jìn)一步研究,建立實用、穩定、準確的性別控製方法,應用於奶牛生產,必將產生巨大的經濟效(xiào)益。

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